實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
產(chǎn)品名稱
實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
管理類別
第三類
型號規(guī)格
QuantStudioTM 1,QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5
結構及組成/主要組成成分
該產(chǎn)品由LED、熱循環(huán)模塊、加熱蓋、電動抽屜(QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5)或手動抽屜(QuantStudioTM 1)、激發(fā)和發(fā)射濾光輪、光學盒、LCD顯示器和觸摸屏、集成計算機、電源和軟件(桌面軟件版本:1.6,QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5儀器固件版本:1.4, QuantStudioTM 1儀器固件版本1.1)組成。
適用范圍/預期用途
該產(chǎn)品基于熒光標記的聚合酶鏈式反應(PCR)原理,與配套的檢測試劑共同使用,在臨床上用于對來源于人體樣本中的靶核酸進行定性或定量檢測,包括人類基因檢測項目和病原體核酸檢測項目。
(一) 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
實時熒光定量pcr儀,由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正;罂梢栽O定域值水平,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。
(二) 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument設備簡介
實時熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件,構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統(tǒng)。
優(yōu)勢編輯 播報
樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點的循環(huán)數(shù))。域值應設定在使指數(shù)期的擴增效率為大,這樣可以獲得準確,可重復性的數(shù)據(jù)。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品,線性回歸分析將產(chǎn)生一條標準曲線,可以用來計算未知樣品的濃度。
(三) 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument技術原理
所謂real-time Q-PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關鍵的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監(jiān)測反應全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)方式生成模板,從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR 中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產(chǎn)物,因此用此終點法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關的熒光信號,隨著反應時間的進行,監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應早期,產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期,因此可以在PCR反應處于指數(shù)期的某一點 上來檢測PCR產(chǎn)物的量,并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較,在real-time Q-PCR反應的指數(shù)期,先需設定一定熒光信號的域值,一般這個域值(threshold)是以PCR反應的15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 (baseline),熒光域值的缺省設置是3~15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認為是真正的信號,它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)(Ct)。Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號達到設定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對數(shù)存在線性關系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線,因此只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。
更新時間:2024/11/12 13:41:15
經(jīng)營許可證號:滬寶食藥監(jiān)械經(jīng)營許20220040號
標簽:實時熒光 實時熒光定量PCR儀 定量PCR儀